PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。面對眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、克隆質(zhì)粒污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、...
文本標(biāo)簽:解決PCR實驗室檢測被污染
PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。面對眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、克隆質(zhì)粒污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,在空氣與液體面摩擦?xí)r,比如在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,開蓋時、吸樣時及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。這樣的污染來的悄無聲息,防不勝防。
雖然這些污染對PCR實驗結(jié)果的影響已經(jīng)受到了廣泛重視,多數(shù)PCR實驗室對污染控制都采取了各種辦法,比如定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域、試劑分裝、操作謹(jǐn)慎、重復(fù)實驗、多角度驗證結(jié)果。但是微量的核酸片段就能被擴(kuò)增,所以對污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的,關(guān)鍵是需要從源頭控制。目前多數(shù)生物試驗室,分子實驗每天都在大規(guī)模進(jìn)行,污染源已經(jīng)無處不在,特異性的,非特異性的,同源的,非同源的,廣泛分布在樣本容器、實驗室臺面,試劑溶液中、儀器表面內(nèi)管附著等等。以下就是為了清除這些污染源研究出來的方法:
解決PCR實驗室檢測被污染的方法
1、酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證污染表面污染得到一定程度的緩解(簡單、方便、成本低)。
2、修飾:標(biāo)記遺傳物質(zhì),阻止聚合酶與核酸的結(jié)合,從而抑制DNA擴(kuò)散(效果相對較好)。
3、酶解:酶可將長鏈的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相對相對較好)。
4、高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段(徹底、成本低)。
5、紫外照射:PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會形成二聚體,延伸終止(方便、范圍廣、成本低)。
有實驗室的地方,就不可避免的會出現(xiàn)實驗室污染。實驗室的污染,不僅會影響實驗與科研的質(zhì)量和效果,還對實驗室工作人員的身體健康有損害。一個好的PCR實驗室,應(yīng)當(dāng)時刻注意污染的監(jiān)測,考慮有無污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。1979在醫(yī)學(xué)、醫(yī)院、臨床、分子生物檢測領(lǐng)域提供實驗室、化驗室、檢驗科、科室的整體設(shè)計、裝修、建設(shè)、改造工程,可提供PCR實驗室設(shè)計方案、PCR實驗室裝修方案、PCR實驗室建設(shè)方案,PCR實驗室改造方案,集實驗室通風(fēng)、實驗室潔凈(凈化)、實驗室給排水、實驗室配電、實驗室供氣、實驗室三廢處理(環(huán)保)等一站式服務(wù)。